ВИДІЛЕННЯ МАТРИКСНОЇ МЕТАЛОПРОТЕЇНАЗИ–2 З НЕТРАНСФОРМОВАНОЇ ТКАНИНИ МОЛОЧНОЇ ЗАЛОЗИ ЖІНОК

Автор(и)

  • Н. В. Мотрук Одеський національний університет імені І. І. Мечникова, Ukraine

DOI:

https://doi.org/10.18524/2077-1746.2016.1(38).72064

Ключові слова:

Матриксна металопротеїназа-2 (ММП-2) – кальцій-залежна та цинквмісна позаклітинна протеїназа (КФ 3.4.24.24), яка бере активну участь у реорганізації позаклітинного матриксу при багатьох фізіологічних і патологічних процесах. Мета дослідження – розробка ме

Анотація

Матриксна металопротеїназа-2 (ММП-2) – кальцій-залежна та цинквмісна позаклітинна протеїназа (КФ 3.4.24.24), яка бере активну участь у реорганізації позаклітинного матриксу при багатьох фізіологічних і патологічних процесах.

Мета дослідження – розробка методу виділення ММП-2 з нетрансформованої тканини молочної залози жінок.

            Для отримання ММП-2 з тканини молочної залози була використана модифікована методика Cawston and Tyler (1979). Модифікація полягала в поетапному осадженні (NH4)2SO4 і використанні іонів Zn2+ і Са2+ для активації та стабілізації активності ферменту.

            Відбір анатомічного матеріалу для досліджень проводили з дотриманням етичних і правових норм. Гомогенати досліджуваних тканин діалізували проти дистильованої води без солей, а також з 2,0 мМ розчинами ZnCl2, CaCl2 або їх суміші. Діалізати піддавали поетапному фракціонуванню (осадження при 20, 40, 60 та 80 %-му насиченні) (NH4)2SO4 з подальшим центрифугуванням при 9000g впродовж 45 хв. Для видалення надлишку (NH4)2SO4 фракції піддавали повторному діалізу у тих же умовах. Активність ММП-2 визначали за гідролізом 0,001 % розчину желатини, вміст білку – методом Лоурі.

            Максимальна питома активність ММП-2 встановлена у фракції, отриманої при 60 %-му насиченні (NH4)2SO4 у присутності суміші іонів Zn2+ і Са2+. Найбільша очистка ММП-2 (у 231,77 рази) і максимальний відсоток виходу ферменту (349,41 %) отримані у фракції 60 %-го насичення (NH4)2SO4 у присутності іонів Са2+. Значне збільшення коефіцієнта очистки під час фракціонування (NH4)2SO4 у присутності іонів Zn2+ і Са2+ свідчить про необхідність додавання цих іонів для активації і стабілізації структури ферменту.

            Результати проведених досліджень свідчать про те, що поетапне осадження сульфатом амонію призводить до фракціонування ММП-2 нетрансформованої тканини молочної залози жінок переважно при 60 %–80 %-му насиченні (NH4)2SO4 (85,0 % усієї активності). Наявність протеїназної активності у фракціях, отриманих при інших насиченнях (NH4)2SO4, що складає 15,0 % сумарної активності ферменту, свідчить, найімовірніше, про наявність множинних форм ММП-2.

Посилання

  1. Vinogradova RP (1978) Molecular mechanisms action of enzymes [Molekulyarnyie mekhanizmy deystviya fermentov], Kiev: Vyshcha shkola, 280 p.
  4. The World Health Organization. Proceedings of the annual reports [Vsemirnaya Organizaciya Zdravokhraneniya. Materialy ezhegodnykh otchetov], Sankt-Peterburg, 1981, 286 p.
  7. Glantz S (1998) Biomedical Statistics [Mediko - biologicheskaya statistika], Moskva: Praktika, 495 p.
  10. Dixon M, Webb E (1966) Enzymes [Fermenty], Moskva: Мir, 816 p.
  13. Kochetov GA (1971) Practical handbook of enzymology [Prakticheskoye rukovodstvo po enzimologii], Moskva: Vysshaya shkola, 352 p.
  16. Lutsenko SV, Kiselev SM, Severin SE (2003) “Molecular mechanisms of tumor angiogenesis” [“Molekulyarnye mekhanizmy angiogeneza opukholi”], Biochemistry J, № 68, 3, pp 349 – 365.
  19. Vovchuk I L Sposib vyznachennya aktyvnosti matryksnoi metaloproteinazy-2 [The method of determination of activity matrix metalloproteinase-2]. Patent № u 2009 08087, Ukraine, 2009.
  21. Plakunov VK (2001) Foundation of enzymology [Osnovy enzimologii], Moskva: Logos, 128 p.
  23. Practical chemistry of albumen: Per. s angl. In editor Darbre A [Prakticheskaya khimiya belka] Moskva: Мir, 1989, 623 p.
  25. Scoups R (1985) Protein purification methods [Metody ochistki belkov], Moskva: Мir, 358 p.
  27. Khasigov Z P, Podobed OV, Ktsoeva SA (2001) “Matrix metalloproteinase of normal human tissues” [“Metalloproteinazy matriksa normalnykh tkaney cheloveka”], Biochemistry J, № 66, 2, pp 167 – 179.
  29. Cawston TE, Tyler JA (1979) “Purification of pig synovial collagenase to high specific activity”, Biochem J, № 183, 3, pp 647 – 656.
  31. Das S, Mandal M, Mandal A (2003) “Identification, purification and partial characterization of tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-2 in bovine pulmonary artery smooth muscle”, Mol Cell Biochem, № 254, 1-2, pp 275 – 287.
  33. Díaz N, Suarez D (2007) “Molecular dynamics simulations of matrix metalloproteinase 2: role of the structural metal ions”, Biochemistry J, № 46, 31, pp 8943 – 8952.
  35. Hipps DS, Hembry RM, Docherty AJ (1991) “Purification and characterization of human 72-kDa gelatinase (type IV collagenase). Use of immunolocalisation to demonstrate the non-coordinate regulation of the 72-kDa and 95-kDa gelatinases by human fibroblasts”, Chem Hoppe Seyler, № 372, 4, pp 287 – 296.
  37. Kandalam V, Basu R, Abraham T (2010) “TIMP-2 deficiency accelerates adverse post-myocardial infarction remodeling because of enhanced MT1 -MMP activity despite lack of MMP2 activation”, Circ. Res, № 106, 4, pp 796 – 808.
  39. Kanomata N (2005) “Expression and localization of mRNAs for matrix
  40. metalloproteinases and their inhibitors in mixed bronchioloalveolar carcinomas with invasive components”, Modern. Pathology, № 18, pp 828–837.
  42. Lowry O H, Rosenbrough N I, Fan A Z, Randol R J (1951) “Protein measurement with the Folin-Phenol reagent”, J Biol Chem, № 194, 1, pp 265 – 271.
  44. Murphy G, McAlpine CG, Poll CT, Reynolds JJ (1985) “Purification and characterization of a bone metalloproteinase that degrades gelatin and types IV and V collagen”, Biochim Biophys Acta, № 831, 1, pp 49 – 58.
  46. Murphy G, Reynolds JJ, Bretz U, Baggiolini M (1982) “Partial purification of collagenase and gelatinase from human polymorphonuclear leucocytes. Analysis of their actions on soluble and insoluble collagens”, Biochem J, № 203, 1, pp 209 – 221.
  47. Nagase H, Visse R, Murphy G (2006) “Structure and function of matrix metalloproteinases and TIMPs”, Cardiovasc. Res, № 69, 3, pp 562 – 573.
  49. Okada Y, Morodomi T, Enghild JJ (1990) “Matrix metalloproteinase 2 from human rheumatoid synovial fibroblasts. Purification and activation of the precursor and enzymic properties” , Eur J Biochem, № 194, 3, pp 721 – 730.

##submission.downloads##

Опубліковано

2016-06-20

Як цитувати

Мотрук, Н. В. (2016). ВИДІЛЕННЯ МАТРИКСНОЇ МЕТАЛОПРОТЕЇНАЗИ–2 З НЕТРАНСФОРМОВАНОЇ ТКАНИНИ МОЛОЧНОЇ ЗАЛОЗИ ЖІНОК. Вісник Одеського національного університету. Біологія, 21(1(38), 11–20. https://doi.org/10.18524/2077-1746.2016.1(38).72064

Номер

Том 21 № 1(38) (2016)

Розділ

Біохімія

Ліцензія

Авторське право (c) 2016 Вісник Одеського національного університету. Біологія

Creative Commons License

Ця робота ліцензується відповідно до Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License.

Автори, які публікуються у цьому журналі, погоджуються з наступними умовами:

  1. Автори залишають за собою право на авторство своєї роботи та передають журналу право першої публікації цієї роботи на умовах ліцензії Attribution-NonCommercial 4.0 International (CC BY-NC 4.0).
  2. Автори мають право укладати самостійні додаткові угоди щодо неексклюзивного розповсюдження роботи у тому вигляді, в якому вона була опублікована цим журналом (наприклад, розміщувати роботу в електронному сховищі установи або публікувати у складі монографії), за умови збереження посилання на першу публікацію роботи у цьому журналі.
  3. Політика журналу дозволяє і заохочує розміщення авторами в мережі Інтернет (наприклад, у сховищах установ або на особистих веб-сайтах) роботи, оскільки це сприяє виникненню продуктивної наукової дискусії та позитивно позначається на оперативності та динаміці цитування опублікованої роботи (див. The Effect of Open Access).

Публікація праць в Журналі здійснюється на некомерційній основі. Комісійна плата за оформлення статті не стягується.